溶劑效應(yīng)指稀釋劑溶劑強(qiáng)度大于流動(dòng)相時(shí)造成色譜峰變形的現(xiàn)象。如用THF溶解樣品，注入流動(dòng)相為乙腈-水（18:82）的反相系統(tǒng)中，可能會(huì)造成峰分叉或拖尾的結(jié)果，還會(huì)導(dǎo)致保留時(shí)間漂移。

表現(xiàn)為液相色譜上較早洗脫的峰前沿或分叉（也有可能表現(xiàn)為肩峰），較晚洗脫的峰則較為正常。也可能全部峰均出現(xiàn)分叉的情況，視溶劑強(qiáng)度而定。

第一階段：樣品剛被注入系統(tǒng)，進(jìn)入色譜柱后，流動(dòng)相氛圍中的目標(biāo)物以正常速度被洗脫。因強(qiáng)溶劑洗脫，移動(dòng)速度快，樣品在空間上開(kāi)始慢慢分裂。

第二階段：在一定時(shí)間內(nèi)，溶劑氛圍中的目標(biāo)物移動(dòng)始終快一些，前后兩部分距離擴(kuò)大。但移動(dòng)快的目標(biāo)物所處氛圍逐漸被流動(dòng)相稀釋(注：因?yàn)槿軇┖土鲃?dòng)相均不保留)，其移動(dòng)速度會(huì)逐漸降至正常流速。直到前面目標(biāo)物的氛圍完全被流動(dòng)相替代，前后兩部分的距離穩(wěn)定下來(lái)。因而，樣品溶劑與流動(dòng)相洗脫強(qiáng)度差距越大，兩部分目標(biāo)物最終的距離拉的越大。

第三階段：所有目標(biāo)物在色譜柱中正常移動(dòng)，但分裂已不可逆轉(zhuǎn)。

經(jīng)過(guò)檢測(cè)器，同一目標(biāo)物給出了兩個(gè)色譜峰。其中進(jìn)柱前即擴(kuò)散進(jìn)入流動(dòng)相的那部分目標(biāo)物組成了后面的色譜峰，它的保留時(shí)間與目標(biāo)物的真實(shí)保留時(shí)間基本吻合。

簡(jiǎn)單概括，強(qiáng)洗脫溶劑不均衡地參與了目標(biāo)物的洗脫，使色譜峰保留時(shí)間整體提前，而樣品在柱前的不充分?jǐn)U散導(dǎo)致了峰形扭曲。這種影響輕則導(dǎo)致峰展寬，嚴(yán)重時(shí)甚至導(dǎo)致峰裂分，給定性定量帶來(lái)災(zāi)難。

水（最弱）＜甲醇＜乙腈＜乙醇＜四氫呋喃＜丙醇＜二氯甲烷（最強(qiáng)）

正相色譜系統(tǒng)溶劑強(qiáng)度順序?yàn)椋?/span>

正己烷（最弱）＜醇/正己烷混合＜乙醇＜四氫呋喃

溶解樣品的溶劑強(qiáng)度大于該樣品出峰時(shí)流動(dòng)相強(qiáng)度，樣品溶劑可以看成流動(dòng)相的一部分，一部分樣品溶解于溶劑中會(huì)被迅速洗脫出色譜柱，而一部分樣品溶解于流動(dòng)相，被流動(dòng)相洗脫出，這樣會(huì)造成色譜峰的展寬或者分叉。

有時(shí)，當(dāng)我們使用流動(dòng)相或流動(dòng)相中的有機(jī)相無(wú)法直接溶解樣品，這時(shí)很多小伙伴會(huì)選擇使用氯仿、甲苯等能溶的溶劑，甚至DMSO這樣的“萬(wàn)能溶劑”來(lái)溶解樣品。這樣進(jìn)樣的結(jié)果是溶劑與流動(dòng)相不兼容，溶質(zhì)難以在流動(dòng)相中擴(kuò)散。

又如，在做參比制劑的溶出曲線中，溶媒中經(jīng)常加入表面活性劑。而帶有表面活性劑的溶劑進(jìn)樣后，由于溶質(zhì)在含有表面活性劑的溶劑中的分配系數(shù)與在流動(dòng)相中的分配系數(shù)存在較大差異，就會(huì)導(dǎo)致峰形的問(wèn)題，甚至保留時(shí)間的漂移。

這就是為什么有時(shí)候會(huì)發(fā)現(xiàn)，HPLC的液相（管路死體積大）比UPLC的液相（管路死體積小）色譜峰型好。

1.導(dǎo)致柱效下降，影響分離。

2.影響峰形，甚至影響定量、定性結(jié)果。比如，在LCMS中，掃描前體離子時(shí)，遇到這種情況，甚至不知道哪個(gè)峰才是目標(biāo)物。

3.當(dāng)標(biāo)樣和樣品的溶劑不一致時(shí)，保留時(shí)間不吻合，同樣影響定性。如酒類成分分析，標(biāo)樣溶于純水，樣品是過(guò)濾的酒，后者的溶劑就是乙醇水，它的保留時(shí)間必定早于純水溶解的標(biāo)樣；再比如水中污染物分析，目標(biāo)物溶于有機(jī)相得到標(biāo)樣，而樣品是過(guò)濾后的天然水；

4.強(qiáng)洗脫的溶劑在基質(zhì)中提取出的雜質(zhì)遇流動(dòng)相會(huì)析出，堵塞針座、柱前管路或色譜柱。

調(diào)整稀釋劑或流動(dòng)相，使二者洗脫能力接近，或稀釋劑洗脫能力稍低于流動(dòng)相。

一般情況下，為避免溶劑強(qiáng)度差異導(dǎo)致的溶劑效應(yīng)，反相色譜中較為穩(wěn)妥的做法是稀釋劑中有機(jī)相比例和流動(dòng)相相當(dāng)，必要時(shí)可略高于流動(dòng)相，但應(yīng)當(dāng)據(jù)其評(píng)估其溶劑效應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)。

如下圖，我們?cè)诜治鍪中曰衔飼r(shí)發(fā)現(xiàn)所有主峰均出現(xiàn)肩峰（或分叉峰），這種情況很容易考慮沒(méi)拆開(kāi)。但所有主峰都分叉的現(xiàn)象在手性化合物分析中是非常罕見(jiàn)的，考慮溶劑效應(yīng)后，用流動(dòng)相溶解樣品后，肩峰消失。

為保證峰形，進(jìn)樣體積一般控制在5-20μL，盡量不超過(guò)25μL。

如不能減少至合適的進(jìn)樣體積，應(yīng)盡量選擇與流動(dòng)相比例相同或接近的溶劑。

使溶劑與流動(dòng)相有較好兼容，目前辦法有兩個(gè)：

a. 若流動(dòng)相或流動(dòng)相中的有機(jī)相無(wú)法直接溶解樣品，則用可以溶解樣品的溶劑溶解成高濃度儲(chǔ)備液，然后用流動(dòng)相稀釋至所需濃度。

b. 在流動(dòng)相中加入同樣的助溶劑或表面活性劑，或提高有機(jī)相的比例。

電離狀態(tài)的差異許多情況下會(huì)表現(xiàn)為保留時(shí)間的漂移或不穩(wěn)定。可以通過(guò)將樣品溶液的pH調(diào)節(jié)至與流動(dòng)相一致，或增大流動(dòng)相的緩沖能力來(lái)改善。

若采用梯度洗脫，在不影響分離度的情況下，可以改用較粗內(nèi)徑的柱前管路。但此法不適用于等度洗脫，會(huì)降低柱效。