對(duì)于新購買到的柱子,首先請(qǐng)注意打開分析測(cè)試說明書,了解柱子的保存溶劑。如果保存溶劑與你將要使用的流動(dòng)相極性不同不會(huì)互溶,請(qǐng)先用異丙醇過渡。過渡過程中注意因異丙醇粘度較大,會(huì)導(dǎo)致柱壓很高,適當(dāng)調(diào)低流速即可。如果要使用的流動(dòng)相中還含有緩沖鹽類,建議在用分析流動(dòng)相之前,先用不含緩沖鹽的同比例流動(dòng)相過渡,這樣可避免緩沖鹽在分析柱內(nèi)的析出。
柱效檢測(cè):
用于判斷一個(gè)用戶是否有經(jīng)驗(yàn)的指標(biāo)之一,是用戶是否習(xí)慣配制一些柱效檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)溶液。說到柱效檢測(cè),我可以向大家提供一個(gè)方法,而且很通用,你也可以用同樣的標(biāo)準(zhǔn)溶液和流動(dòng)相來檢測(cè)硅膠柱和氰基柱。
流動(dòng)相:
10%乙酸乙酯+90%正己烷流速1.0
標(biāo)準(zhǔn)溶液:
乙苯(如乙苯找不動(dòng)就用甲苯代替唄)+苯甲酸甲酯
檢測(cè)波長254nm
這個(gè)方法特別適用于新購柱子(新購柱子往往保存在正相溶劑中)時(shí)即進(jìn)行檢測(cè),如有問題,可及時(shí)與供應(yīng)商溝通。也適合在柱子在準(zhǔn)備放置相當(dāng)長一段時(shí)間之前進(jìn)行充分清洗后進(jìn)行檢測(cè)作為記錄留檔。在平常的使用過程中,如果分析物是固定重復(fù)的,我們當(dāng)然可以從對(duì)分析物的分離分析情況來作出判斷;但如果分析物和分析條件不同時(shí),定期檢測(cè)柱效可以避免柱效下降導(dǎo)致分離不佳再分析查找原因這樣浪費(fèi)人力物力的過程。不過特別要注意的是,當(dāng)氨基柱(或氰基柱)在反相條件中使用時(shí),如用該條件檢測(cè),請(qǐng)注意流動(dòng)相的換相過渡問題。
氨基柱的使用:
需要注意的是,氨基柱的鍵合官能團(tuán)氨丙基要比C18,C8柱的鍵合官能團(tuán)C18,C8要容易水解,所以首先要做好其使用壽命稍遜的心理準(zhǔn)備,特別是當(dāng)你的使用條件是反相條件下時(shí)。
反相條件下使用時(shí),要特別注意控制PH值范圍,PH值越低越有發(fā)生水解的危險(xiǎn),流動(dòng)相中水的比例越高當(dāng)然也越有發(fā)生水解的危險(xiǎn)。所以,在使用后以及準(zhǔn)備長時(shí)間放置該柱時(shí),必要的清洗和將氨基柱保存于純的有機(jī)溶劑中是很好的保養(yǎng)措施。
有一種情況是,當(dāng)使用氨基柱進(jìn)行酸性物質(zhì)如果汁的分析時(shí)(分析其中的糖份),酸性物質(zhì)的存在意味著質(zhì)子的存在,可能會(huì)使略帶負(fù)電荷的氨基官能團(tuán)質(zhì)子化,導(dǎo)致使用一段時(shí)間后對(duì)于某些類的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降。這時(shí),Kromasil專家所給的建議是:用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0%NH3的50-50乙腈-水溶液沖洗該柱(沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動(dòng)相洗去多余氨),之后再進(jìn)行分析這類酸性分析物時(shí)建議在流動(dòng)相中略微添加少許氨如0.1%。
氨基柱的清洗
簡單說起來,正相條件下使用的氨基柱你就參照硅膠柱的清洗方法;反相條件下使用的氨基柱你就參照C18的清洗方法。